谷氨酰胺合成酶（GS）測試盒實驗操作

谷氨酰胺合成酶（GS)測試盒實驗操作

測定意義：GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內氨同化的關鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
測定原理：GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進一步轉化為γ─谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡合物；該絡合物在540nm 處有最大吸收峰，可用分光光度計測定。
所需的儀器和用品：可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產品說明： GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內氨同化的關鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺， 不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。 GS 在ATP和Mg 2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進一步轉化為γ-谷氨酰基異羥肟酸， 在酸性條件下與鐵形成紅色的絡合物；該絡合物在540nm處有最大吸收峰。

注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品： 可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
谷氨酰胺合成酶（GS)測試盒實驗操作
 

樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻） 細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10 4個）：提取液體 積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功 率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 血清（漿）樣本：直接檢測。