昆蟲elisa檢測試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩(wěn)定性。
1、標準品的稀釋：（本試劑系統(tǒng)提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執(zhí)行：
120ng/ml：（5號標準品）：120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
60ng/ml：（4號標準品）：120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
30ng/ml：（3號標準品）：120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
15ng/ml：（2號標準品）：120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
7.5ng/ml：（1號標準品）：120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液
2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3、 加樣：
a、空白孔：（空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗保幼激素(JH)抗體，鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同 ；
b、標準品孔：加入標準品50μl，鏈霉親和素-HRP50μl（標準品中已事先整合好生物素標記抗體，故在操作時不加，只加鏈霉素-HRP）；
c、樣本反應孔：加入樣本40μl，然后各加入抗保幼激素(JH)抗體10μl、鏈霉親和素-HRP（空白孔除外）50μl。蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
7、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
結果判斷：
1、每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。
2、根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應用軟件來計算。
3、手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析計算結果。
4、若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數(shù)。
在線客服
電話咨詢
